Tingkat pengangguran terdidik yang berstatus sarjana dikhawatirkan akan terus meningkat jika perguruan tinggi sebagai lembaga pencetak sarjana tidak memiliki kemampuan mengarahkan peserta didik dan alumninya untuk menciptakan lapangan kerja setelah lulus. Rendahnya motivasi generasi muda Indonesia dalam berwirausaha saat ini menjadi pemikiran serius berbagai pihak baik pemerintah, dunia pendidikan, dunia industri, maupun masyarakat. Salah satu solusi yang dapat dilakukan untuk mengatasi pengangguran di Indonesia adalah dengan menciptakan wirausaha. Perlu adanya penyelenggaraan pembelajaran di perguruan tinggi yang diharapkan mampu membangkitkan semangat berwirausaha, berdikari, berkarya dan mengembangkan perekonomian nasional. Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui besarnya pengaruh pembelajaran bioteknologi tanaman obat terhadap motivasi berwirausaha mahasiswa minat studi Teknobio Industri, Fakultas Bioteknologi, Universitas Atma Jaya Yogyakarta. Penelitian ini merupakan penelitian asosiatif kausal dengan pendekatan kuantitatif.  Teknik pengambilan data pada penelitian ini menggunakan metode kuesioner dan dokumentasi. Analisis data yang digunakan yaitu uji regresi linier sederhana. Hasil penelitian ini menunjukkan bahwa pembelajaran mata kuliah bioteknologi tanaman obat berpengaruh positif dan signifikan terhadap motivasi berwirausaha mahasiswa ditunjukkan oleh nilai F hitung 2,387 dengan nilai signifikansi 0,342 dan R² 0,117. Dari hasil tersebut diperoleh informasi bahwa 11,7 % perubahan pada variabel motivasi berwirausaha (Y) dipengaruhi oleh variabel pembelajaran Bioteknologi Tanaman Obat (X), sedangkan 98,3 % dipengaruhi oleh variabel-variabel lain yang tidak diteliti dalam penelitian ini.